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简单多肽、蛋白及生物工程制品分析

来源:奔驰糖果派对攻略 作者:生物质谱实验室 时间:2009-04-10 点击:

 4. 蛋白质等电点测定

实验设计:IEF等点聚焦电泳、胶条染色

 技术简介:

  等电点是蛋白质的重要理化性质之一,有PH3-10线形和非线性、PH4-7、PH6-9等多种PH范围的胶条可供选择,以期得到较好的测试结果。

5. 蛋白质/多肽N-糖基化位点分析

实验设计:样本处理、糖苷酶去除N-糖链、O18标记糖基化位点、质谱分析、数据检索

技术简介:

  糖蛋白在细胞内部,细胞膜和细胞外均有发现,实际上大部分蛋白质是糖蛋白。对糖蛋白的检测和分析发现,糖蛋白中糖组分的结构和功能具有多样性。糖基化的多样性与细胞周期,细胞分化和发展的状态有关。在蛋白组时代中,蛋白质的修饰会引起其理化性质的改变,因此是不容忽视的。目前,人们主要研究糖肽,其好处之一就是质量小,这就会得到更好的分辨率,而且糖肽仍保留了糖基化位点。将分离的糖蛋白用不同的蛋白酶消化后就可进行糖肽的研究。一旦糖肽被识别出,就可以用串连质谱(ESI-MS/MS)来阐明肽序列。

  糖基化作用是一种最常见也非常重要的翻译后修饰作用。一种大规模鉴定N端糖基化蛋白的方法——糖肽位点特异性同位素标记(isotope?coded glycosylation?site?specific tagging),使用凝集素亲和捕获蛋白质混合物中经胰蛋白酶消化后的糖肽,然后以18O标记N端糖基化的肽,18O 标记的肽之后通过多维LC-MS技术进行鉴定。由于这种方法使用于大量糖蛋白的系统化鉴定,它将极大促进糖生物学的研究,并有利于诊断学方法的进步,如对与疾病相关的糖蛋白的大规模基因组扫描。

6. 蛋白质/多肽磷酸化位点分析

实验设计:质谱分析、数据检索、磷酸化位点确定

技术简介:

  蛋白质磷酸化作用是重要的翻译后修饰作用之一。磷酸化通常发生在丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸的侧链,在组氨酸、谷氨酸侧链也有发生。选择性分离磷酸化肽结合LC-MS/MS,特异修饰抗体、酶促反应结合定量蛋白质组学技术鉴定丝氨酸和苏氨酸位点上不同的修饰,将从全蛋白分离得到的高频率自由氨基酸基团进行稳定同位素标记,适用于任何蛋白样品,包括从组织或体液中获得的抽提物,同时也适于目前蛋白质组学研究中的分离方法。此法在定量蛋白质组时具有高精确度和可重复性,并有很高的序列覆盖率。